Калорийность: Не указана Время приготовления: Не указано Для домашней...
При работе с вируссодержащим материалом необходимо выполнять следующие требования:
· не допускать рассеивания вирусов во внешней среде;
· предотвратить контаминацию (загрязнение) вируссодержащего vатериала посторонней микрофлорой;
· обеспечить личную безопасность.
Режим работы вирусологической лаборатории регламентируется законами Российской Федерации, международными правилами проведения диагностических лабораторных исследований, правилами внутреннего распорядка. Весь персонал лаборатории проходит инструктаж и обучение безопасным методам труда, обеспечивается спецодеждой, спецобувью, средствами санитарной защиты и защитными приспособлениями в соответствии с действующими нормами. Вход в производственные помещения посторонним лицам категорически запрещен. Сотрудники вирусологической лаборатории обязаны соблюдать правила работы, предупреждающие загрязнения бактериями и грибами исследуемого материала, возможность заражения персонала и распространения инфекции.
Запрещено выходить за пределы лаборатории в халатах и спецобуви или надевать верхнюю одежду на халат, курить, принимать пищу в производственных помещениях и хранить в них продукты питания. В боксе работают в стерильном халате, маске, шапочке, в некоторых случаях надевают очки и перчатки. Обязательно меняют обувь. Не допускаются хождение и разговоры во время работы.
Весь материал, поступающий в лабораторию на исследование, должен рассматриваться как инфицированный!
С инфекционным материалом следует обращаться крайне осторожно. При распаковке его банки необходимо протирать снаружи дезинфицирующим раствором и ставить их на поднос или в кювет. Рабочее место на столе покрывают несколькими слоями марли, увлажненной 3 – 5 % раствором хлорамина. Жидкости, содержащие вирусы, переливают над кюветами с дезинфицирующим раствором. При работе с пипеткой пользуются грушей. Пипетки, предметные стекла, стеклянную посуду и резиновые изделия, задействованные в работе с инфекционным материалом, обеззараживают погружением в 5 % раствор хлорамина или растворы фенола, лизола, серной кислоты. Запрещается выносить из лаборатории оборудование, инвентарь, материалы и т. д. без предварительной их дезинфекции. По окончании работы рабочее место приводят в порядок и дезинфицируют. Вируссодержащий материал, необходимый для дальнейшей работы, ставят на хранение в холодильник и опечатывают. Руки в перчатках промывают в банке с 5 % раствором хлорамина, затем перчатки снимают, обеззараживают вторично, дезинфицируют и моют.
ТРЕБОВАНИЯ К РАБОЧИМ ПОМЕЩЕНИЯМ И ОБЕСПЕЧЕНИЕ УСЛОВИЙ РАБОТЫ
Современные требования к лабораторным диагностическим комплексам и отдельным составляющим (полы, стены, потолки, системы отопления, вентиляции, водоснабжения и канализации) изложены в правилах лабораторной практики GLP.
Вирусологические отделы лабораторий и научно-исследовательских ветеринарных станций призваны осуществлять лабораторную диагностику вирусных инфекций, контролировать заболеваемость животных, вызываемую вирусами в межэпизоотический период, а также учитывать состояние и напряженность специфического постинфекционного и поствакцинального противовирусного иммунитета, участвовать в организации и проведении профилактических мероприятий в борьбе с вирусными и хламидийными заболеваниями животных в обслуживаемом регионе.
Структура вирусологической лаборатории определяется задачами и особенностями ее деятельности. Размещать лабораторию желательно в двухэтажном здании или в изолированном отсеке. Боксы предпочтительнее располагать с северной, теневой стороны здания, чтобы избежать попадания в них прямых солнечных лучей, или следует застеклить окна боксов молочным или матовым стеклом. Полы в коридорах и комнатах для сотрудников могут быть паркетными, покрытыми лаком; в остальных – из плотного, влагонепроницаемого, устойчивого к дезинфектантам материала. Деревянные полы покрывают пластиком. Стены и потолки лаборатории должны быть также устойчивыми к дезинфектантам, легко подвергаться мойке. В боксах всю площадь целесообразно отделывать кафельной плиткой. Двери боксов должны быть раздвижными. Это позволяет сэкономить площадь и избежать колебания воздуха. В плоскости двери устраивают окошко с небольшой площадкой Целесообразно иметь боксы следующего назначения: для получения и культивирования клеток – 1–2 бокса; для заражения культуры клеток – 1–2, для заражения куриных эмбрионов – 1–2 бокса; для заражения подопытных животных – 1 бокс; для вскрытия подопытных животных – 1 бокс; для склада стерильного стекла – 1 помещение.
Основные диагностические работы должны проводиться в настольных или стационарных ламинарных боксах (разного класса) с системой защиты оператора, предупреждения контаминации исследуемого материала, защиты окружающей среды от вредных и опасных выбросов.
Помещения несколько больших размеров (примерно 4х4 м) выделяют для серологических исследований, уничтожения инфекционного материала, приготовления и стерилизации лабораторной посуды и других материалов, приготовления питательных сред и растворов, а также для сотрудников.
Лаборатория (отдел) вирусологии должна быть обеспечена холодной и горячей водой, желательны подача пара и газа, наличие централизованного вакуум-провода и подачи воздуха под давлением.
Каждый бокс комплектуют соответствующей мебелью и оборудованием. Примерная схема размещения оборудования и приборов представлена на рисунке 1. Наиболее важен стол, размер которого зависит от выполняемых на нем работ. В связи с тем, что многие работы приходится выполнять вдвоем, стол рекомендуется располагать параллельно стене, чтобы два работника сидели друг против друга, или ставить его к стене в виде буквы Т, что позволяет более экономно использовать площадь стола. Шкафчики для стеклянной посуды и мелкого инвентаря можно устроить под столом или повесить на стену. Покрытие лабораторного стола должно быть устойчивым к действию дезинфицирующих веществ. Лабораторные стулья лучше всего металлические, так как они легко очищаются и дезинфицируются. Над рабочим местом устанавливают бактерицидные лампы (БУВ-30). У входа в бокс кладут резиновый губчатый коврик, пропитанный дезраствором. В предбокснике находятся стерильные халаты, колпаки, косынки, маски и тапочки, перчатки, которые надевают перед работой в боксе, и, в зависимости от назначения бокса, соответствующее оборудование (термостат, холодильник, водяная баня, центрифуга и пр.).
Рисунок 1 - Схема размещения оборудования: а – для работы с культурами клеток, б – для изготовления сред и растворов для культур клеток
Рисунок 2 - Микробиологический защитный бокс I класса:1 – вытяжной вентилятор; 2 - высокоэффективный воздушный фильтр; 3 - смотровая стеклянная панель; 4- открытый проем для рук работающего; 5 - штуцера для подводок воды, воздуха
Рисунок 3 - Бокс с ламинарной подачей стерильного воздуха:1 – газовая горелка, 2 – матрас, 3 – резиновая груша
Ограничить численность бактерий можно с помощью бактерицидных лампБУВ-15 и БУВ-30. Значительного снижения количества бактерий в воздухе боксов и предбоксников, на поверхности столов и другого оборудования можно достигнуть обработкой аэрозолем перекиси водорода и некоторых других веществ. Уборку помещений проводят влажным способом: полы, стены, мебель протирают марлей, увлажненной дезраствором.
Для вирусологической лаборатории любого типа обязательной частью оборудования должен быть настольный бокс, содержащий бактерицидную лампу, еще лучше – ламинарный шкаф с подачей стерильного воздуха (рис. 2, 3).
При работе в вирусологической лаборатории необходимо строго соблюдать методы и правила асептики и антисептики!
Асептика – система мероприятий и приемов работы, предупреждающих попадание микроорганизмов и вирусов из окружающей среды в организм человека, а также в исследуемый материал. Она предусматривает использование стерильных инструментов и материалов, обработку рук сотрудников, соблюдение особых санитарно-гигиенических правил и приемов работы.
Антисептика – комплекс мероприятий, направленных на уничтожение микроорганизмов и вирусов, способных вызвать инфекционный процесс при попадании на поврежденные или интактные участки кожи и слизистых оболочек. В качестве антисептиков используют различные химические вещества: 70%-ный этиловый спирт, 5%-ный спиртовой раствор йода, 0,5–3%-ный раствор хлорамина, 0,1%-ный раствор перманганата калия, 0,5–1%-ный раствор формалина, 1-2%-ные спиртовые растворы метиленового синего или бриллиантового зеленого.
Дезинфекция – обеззараживание объектов окружающей среды путем уничтожения патогенных для человека и животных микроорганизмов и вирусов физическими способами и с помощью химических веществ: растворами хлорной извести (0,1–-10%-ным), формалина, хлорамина (0,5-5%-ным), фенола (3–5%-ным), лизола (3–5%-ным), едкой щелочи (2–3%-ным) и др. Выбор дезинфицирующего вещества и его концентрации зависит от материала, подлежащего дезинфекции.
В лабораториях для дезинфекции боксов чаще всего применяют пары формалина (30–35 мл 40%-ного раствора формальдегида на 1 м 3 помещения), ß-пропиолактон (1,1 л на 100 м 3 помещения) или испаряют карболовую кислоту (не реже одного раза в неделю) и ежедневно делают влажную уборку с применением растворов хлорамина, гидроксида натрия и др.
Стерилизация – обеспложивание, т. е. полное уничтожение микроорганизмов и вирусов в различных материалах. Стерилизацию проводят физическими (воздействием высокой температуры, путем ультрафиолетового облучения, фильтрацией жидкостей через бактериальные фильтры) и химическими методами.
Физические методы стерилизации:
а) прокаливание в пламени спиртовки или горелки. Данный способ применяют для стерилизации препаровальных игл, петель из аппарата Такачи, пинцетов, горловин культуральных сосудов и т. д.;
б) стерилизация кипячением. Этим методом стерилизуют шприцы, мелкий хирургический инструмент, предметные и покровные стекла и другие предметы. Кипятят не менее 30 мин. Однако данный метод не обеспечивает полной стерилизации, так как некоторые вирусы, например вирус гепатита, и споры бактерий могут остаться при этом жизнеспособными;
в) стерилизация сухим жаром в сушильном шкафу. Метод основан на действии нагретого до 165–180°С воздуха. Сухим жаром стерилизуют стеклянную посуду;
г) стерилизация в автоклаве паром под давлением. Это один из наиболее эффективных методов стерилизации, поэтому он широко применяется;
д) стерилизация в аппарате Коха или автоклаве текучим паром (давление 100–150 кПа (1–1,5 атм.), экспозиция 30 мин). Применяют для стерилизации материалов, не выдерживающих воздействия высокой температуры, например питательных сред с витаминами и углеводами;
е) стерилизация ультрафиолетовыми лучами. Метод основан на бактерицидном действии УФ-лучей с длиной волны 260– 300 мкм. Для стерилизации воздуха в боксах используют лампы БУВ-15, БУВ-30. Обычно облучение проводят 1–2 ч;
ж) фильтрование жидкостей через бактериальные фильтры. Этим методом пользуются для освобождения питательных сред, сыворотки крови, витаминов и т. д. от бактерий, но не от вирусов.
При работе с патологическим материалом, содержащим микробы, и особенно при культивировании патогенных микробов во избежание заражения персонала лаборатории необходимо соблюдать правила техники биологической безопасности. В зависимости от степени патогенности и контагиозности возбудителей принято выделять четыре уровня биологической опасности и соответствующих мероприятий, необходимых для предупреждения заражения в лаборатории.
Первый уровень (работа с непатогенными микроорганизмами). Необходимо соблюдение стандартных правил (см. тему 1.1).
Второй уровень (работа с низковирулентными микроорганизмами). К числу дополнительных правил и мероприятий относятся использование лабораторной одежды и защитных перчаток; обязательное обеззараживание всех загрязненных отходов; ограничение доступа в лабораторию. Для предотвращения попадания микробов в воздух рабочего помещения выполнение механических манипуляций, сопряженных с высокой вероятностью распыления микроорганизмов, необходимо осуществлять в специализированных закрытых легкодезинфици-руемых настольных боксах.
Третий уровень (работа с высоковирулентными микроорганизмами). К числу дополнительных правил и мероприятий относятся использование специальной защитной лабораторной одежды; контроль доступа в лабораторию. Все манипуляции с патологическим материалом необходимо осуществлять в специализированных боксах.
Четвертый уровень (работа с возбудителями ООИ). Работа с возбудителями особо опасных инфекций (ООИ) разрешена исключительно в специализированных режимных лабораториях,
Имеющих оборудование, необходимое для эффективной защиты от патогенных микробов, их контроля и уничтожения. К числу дополнительных правил и мероприятий относятся наличие отдельных помещений для смены лабораторной одежды и душевых, обязательное обеззараживание всех отходов лаборатории. Все манипуляции с патологическим материалом необходимо осуществлять в специализированных настольных боксах, снабженных системами стерилизации воздуха (см. тему 7.1).
■ ОЦЕНКА РЕЗУЛЬТАТОВ КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКИХ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ
Обнаружение патогенных микроорганизмов, являющихся возбудителями заболеваний (например, микобактерии туберкулеза, гонококки и др.), имеет решающее значение для постановки диагноза.
Выявление роли условно-патогенных микроорганизмов в этиологии и патогенезе заболеваний должно быть основано на строгой аргументации. Обязательным условием является клиническое, эпидемиологическое, микробиологическое и серологическое исключение возбудителей инфекционных болезней (например, возбудителей кишечных инфекций, венерических болезней и др.). Для оценки роли условно-патогенных микроорганизмов в патологии могут быть использованы следующие критерии.
1. Выделение микроорганизмов из крови, спинномозговой жидкости или других жидкостей организма, которые в норме у здоровых людей являются стерильными.
2. Обнаружение в исследуемом материале, особенно при дисбактериозах, условно-патогенных микроорганизмов в достаточно больших количествах (например, 10 5 -10 7 микробных клеток в 1 мл). Для этого проводят количественное определение микроорганизмов по числу КОЕ в 1 г или 1 мл испытуемого образца. Эти количественные показатели могут варьировать в зависимости от вида микроорганизмов, типа исследуемого материала, характера и стадии заболевания.
3. Повторное, многократное (в течение суток или через сутки) выделение одного и того же микроорганизма из одного и того же материала от больного (например, из крови при сепсисе и т.д.).
4. Обнаружение идентичных условно-патогенных микроорганизмов в разных образцах материала (например, при пищевых токсикоинфекциях - в промывных водах желудка, рвотных массах, испражнениях, пищевых продуктах).
5. Нарастание титра антител в 4 раза и более в парных сыворотках крови больного в отношении условно-патогенного микроорганизма, который предполагается как возбудитель дан-
ного патологического процесса. В ряде случаев рекомендуется использовать в качестве антигенов аутоштаммы микроорганизмов, выделенные от больных.
6. Положительные кожно-аллергические реакции у больных с аллергенами, приготовленными из условно-патогенных микроорганизмов.
7. В случае внутрибольничных (нозокомиальных) инфекций - выделение идентичных культур микроорганизмов от группы больных.
8. Совпадение данных лабораторного определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам с эффективностью антимикробной терапии в клинических условиях, подтверждаемое улучшением состояния больного и уменьшением количества или элиминацией соответствующих микроорганизмов.
9. Условно-патогенные микроорганизмы (синоним: оппортунистические) представляют собой большую группу микроорганизмов, занимающих различное систематическое положение. Они встречаются среди аэробных и анаэробных бактерий, грибов, простейших. В клинической микробиологии наиболее часто встречаются условно-патогенные микроорганизмы, относящиеся к родам Staphylococcus, Streptococcus, Escherichia, Klebsiella, Proteus, Entewbacter, Citrobacter, Serratia, Pseudomonas, Haemophilus, Bacteroides, Veillonella, Vibrio, Peptococcus, Peptostreptococ-cus, Mycobacterium, Mycoplasma, Candida и др.
■ ОФОРМЛЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ЛАБОРАТОРНЫХ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ
Результаты лабораторных исследований оформляют на специальных бланках, которые передают лечащему врачу.
1. В ответе прежде всего указывают наличие патогенных, а также условно-патогенных микроорганизмов, обнаруженных при микробиологическом исследовании. Сообщают также данные лабораторного определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам.
2. При обнаружении микробных ассоциаций перечисляют все микроорганизмы, указывают доминирующие виды и количественные микробиологические показатели.
3. В соответствии с правилами международной номенклатуры в ответах приводят видовые названия микроорганизмов, например: Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa и т.д.
4. С целью ускорения лабораторных исследований в ряде случаев при выделении условно-патогенных микроорганизмов вполне допустимо в ответе ограничиться указанием только родовой принадлежности обнаруженных микроорганизмов, например Proteus sp., Candida sp. и т.д.
Аэробные бактерии Грамположительные бактерии
Chryseobacterium indologenes Chryseobacterium meningosepticum Enterococcus faecalis и другие виды Enterococcus Erysipelothrix rhusiopathiae Staphylococcus aureus Staphylococcus epidermidis Staphylococcus saprophiticus и другие виды Staphylococcus Streptococcus pyogenes Streptococcus agalactiae
Грамотрицательные бактерии
Burkholderia cepacia Citrobacter koseri Edwardsiella tarda Eikenella corrodens Enterobacter spp. Escherichia coli Haemophilus influenzae Klebsiella spp. Listeria monocytogenes Moraxella catarrhalis Proteus vulgaris Proteus mirabilis Pseudomonas aeruginosa Pseudomonas putida Pseudomonas fluorescens Salmonella enterica
подвид enterica биовар typhimurium Serratia spp. Spirillum minus Streptobacillus moniliformis Vibrio vulnificus
Анаэробные бактерии
Неспорообразующие грамотрицательные анаэробы
Bacteroides fragilis
и другие виды рода Bacteroides
Prevotella melaninogenica
и другие виды рода Prevotella
Porphiromonas spp.
Fusobacterium spp.
Veilonella spp.
Неспорообразующие грамположительные анаэробы
Peptostreptococcus spp. Propionibacterium acnes
Спорообразующие грамположительные анаэробы
Clostridium perfringens Clostridium novyi Clostridium septicum Clostridium histolyticum Clostridium ramosum Clostridium sporogenes Clostridium tetani
Бактерии, перечисленные выше, вызывают гнойно-воспалительные процессы различной локализации, в том числе ангины, фурункулы, циститы и пиелиты, плевриты, перикардиты, сепсис и др. Многие из этих возбудителей встречаются в нормальной микрофлоре человека и проявляют свою патогенность только при нарушении нормальной экологии.
Стафилококки, стрептококки, протей, эшерихии и анаэробные бактерии нередко вызывают смешанную инфекцию как в разнообразных сочетаниях между собой, так и с другими микроорганизмами - вирусами, грибами.
Тема 12.1. АЭРОБНЫЕ БАКТЕРИИ -ВОЗБУДИТЕЛИ ГНОЙНО-ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ И РАНЕВЫХ ИНФЕКЦИЙ
▲ Программа
1. Биологические свойства возбудителей гнойно-воспалительной и раневой инфекции, их патогенность, экология, особенности инфекции и эпидемиология вызываемых заболеваний.
2. Микробиологическая диагностика.
3. Диагностические препараты, профилактические и лечебные препараты.
А Демонстрация
1. Рост а- и р-гемолитических стрептококков на кровяном агаре.
2. Рост и образование пигмента P.aeruginosa на агаре.
3. Диагностические и лечебно-профилактические препараты.
ЗАНЯТИЕ 1
▲ Задание студентам
1. Микроскопировать и зарисовать мазки из чистых культур возбудителей гнойных инфекций: S.aureus, S.pyogenes, P.aeruginosa, E.coli, P.vulgaris. Окраска по методу Грама.
2. Микроскопировать и зарисовать мазки из гноя, содержащие возбудителей: стафилококков, стрептококков. Окраска по методу Грама.
3. Ознакомиться с питательными средами, применяемыми при микробиологической диагностике гнойных и раневых инфекций. Указать назначение отдельных питательных сред.
4. Микробиологическое исследование при раневых и гнойных инфекциях:
а) указать материал, подлежащий исследованию;
 |
 |
б)
микроскопический метод: микроскопировать мазок
из гноя, окраска по методу Грама. Сделать вывод;
в) наметить план дальнейшего исследования.
ЗАНЯТИЕ 2
Задание студентам
1. Микробиологическое исследование гноя:
а) учесть результат посева гноя на кровяной агар в
чашке Петри, описать подозрительные колонии,
отметить наличие гемолиза, составить план даль
нейшего исследования;
б) учесть результаты определения лецитиназы и плаз-
мокоагулазы у выделенной культуры стафилококка.
Сделать вывод;
в) учесть результаты определения чувствительности
культуры стафилококка к антибиотикам. Сделать
вывод.
2. Микробиологическое исследование мочи. Определить количество бактерий в 1 мл мочи по результатам метода секторных посевов. Дать заключение.
3. Серодиагностика ревматизма. Ознакомиться с описанием стрептолизиновой реакции. Внести в протокол результаты определения анти-О-стрептолизина в сыворотке крови больного. Сделать вывод.
4. Дать краткую характеристику демонстрируемым антимикробным, диагностическим и лечебно-профилактическим препаратам.
Материал для исследования: раневое отделяемое, гной, экссудат, моча, мазки со слизистых оболочек (носоглотки, зева и др.), кровь при подозрении на сепсис.
Микробиологическая диагностика стафилококковых инфекций МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:
Бактериоскопическое исследование (схема 12.1.1). Из исследуемого материала (за исключением крови) готовят мазки для первичной бактериоскопии, окрашивают по методу Грама и микроскопируют. Наличие в препаратах грамположительных кокков, располагающихся в виде гроздевидных скоплений (рис. 12.1.1; на вклейке), позволяет поставить предварительный диагноз стафилококковой инфекции. Следует иметь в виду, что в патологическом материале стрептококки редко образуют типичные скопления, чаще располагаются поодиночке или небольшими группами по 2-3 бактерии.
Бактериологическое исследование. Испытуемый материал засевают петлей на чашки с кровяным и желточно-солевым агаром
Рис. 1.4. Культура дрожжей Sac--charomyces cerevisiae при разных методах микроскопии К с. 14. а - микроскопия мазка, окрашенного метиленовым синим; б - тем-нопольная микроскопия; в - фазо-во-контрастная микроскопия- г - люминесцентная микроскопия. Окраска корифосфином.
Рис.2.2.1. Смесь стафилококков и кишечных палочек. К с. 23. Окраска по методу Грама.
 |
 |
Рис.3.2.1. "Пестрый ряд". К с. 46.
а - ферментация углевода до кислоты и газа; б - отсутствие ферментации;
в - образование индола; г - образование сероводорода.
Рис.6.2. Постановка опыта специфической трансдукции (схема).Я" с. 26
пп™Ь Г i dga " ; б ~ реципиент E - coli 1ас "; в - Рост колоний реципиентного „» рп Т^- ВДо; г *" ^Раженная транслирующим фагом X dgal культура b.coli lac ; д - рост колоний трансдуктантов (красного цвета), несущих ген gal, на среде Эндо.
Рис.6.1. Постановка опыта трансформации. К с. 68. контает С пе?™г5 НК " в ™ еленно? из B.subtilis; б - реципиент B.subtilis; в -
селенной с^Л ЫХ ба,СГерИЙ С ДНК; Г ~ рост колоний Рекомбинантов на штамма н L?™ со й С1 Р ептоми «ином; д - отсутствие роста реципиентного 1мма на селективной среде со стрептомицином; е - рост колоний реципиентного штамма на среде без стрептомицина.
 |
Рис.6.3. Постановка опыта по конъюгации. К с. 70. а - рост колоний бактерий донора на минимальной среде без стрептомицина; б - рост колоний рекомбинантов на селективной среде со стрептомицином без лейцина; в - рост колоний бактерий реципиентов на полной среде со стрептомицином и лейцином; г - отсутствие роста бактерий донора на среде со стрептомицином; д - донор-культура E.coli F , lei , su 5 ; е - контакт между бактериями донора и реципиента; ж - реципиент-культура E.coli F", lei", st/; з - отсутствие роста бактерий реципиента на селективной среде со стрептомицином без лейцина.
 |
 |
Рис. 12.1.1. Staphylococcus aureus и Streptococcus pyogenes в гное. Окраска по методу Грама. К с. 160.
Рис. 12.2.1. Clostridium perfringens в отечной жидкости. К с. 174.
Рис.19.1.1. Тельца Бабеша -Нег-ри в нейронах гиппокампа. Срез головного мозга человека. К с. 305. Окраска по методу Романовского - Гимзы.
(ЖСА) для получения изолированных колоний. Посевы инкубируют при 37 °С в течение суток. На следующий день исследуют выросшие колонии на обеих средах. На кровяном агаре отмечают наличие или отсутствие гемолиза (рис. 12.1.2; на вклейке). На ЖСА S.aureus образует золотистые круглые выпуклые непрозрачные колонии. Вокруг колоний стафилококков, обладающих ле-цитиназной активностью, образуются зоны помутнения с перламутровым оттенком. Для окончательного установления вида стафилококка 2-3 колонии пересевают в пробирки со скошенным питательным агаром для получения чистых культур с последующим определением их дифференциальных признаков (табл. 12.1.1).
Таблица 12.1.1. Дифференциальные признаки стафилококков
| Вид |
| S.aureus |
| S.sapro-phyticus |
S.epider-midis
Образование:
плазмокоагулазы + - -
лецитиназы + - -
альфа-токсина + - -
Ферментация:
глюкозы + + -
маннита в анаэробных условиях + - +
Чувствительность к новобиоцину S S R
Условные обозначения:(+) - наличие признака; (-) - отсутствие признака; S - чувствительный; R - резистентный.
Для постановки реакции на плазмокоагулазу плазму крови, разведенную в 2 раза, разливают по 0,4 мл в пробирки, вносят туда по одной петле каждой исследуемой культуры стафилококка и помещают в термостат при 37 °С. Через 2, 4 и 24 ч отмечают результаты опыта. При наличии плазмокоагулазы образуется сгусток. В некоторых случаях наряду с плазмокоагу-лазой и лецитиназой определяют фибринолизин, гиалуронидазу, ДНКазу.
Для установления источника внутрибольничной инфекции выделяют чистые культуры стафилококка от больных и бактерионосителей, после чего проводят их фаготипирование с помощью набора типовых бактериофагов. Фаги разводят до титра, указанного на этикетке. Каждую из исследуемых культур засевают на питательный агар в чашку Петри газоном, высушивают, а затем петлей каплю соответствующего фага наносят на квадраты (по числу фагов, входящих в набор), предварительно размеченные карандашом на дне чашки Петри. Посевы инкубируют при 37 "С. Результаты оценивают на следующий день по наличию лизиса культуры (см. рис. 5.3.2).
Определение чувствительности стафилококка к антибиотикам - см. тему 7.2.
Экспресс-методы диагностики: иммунохимические, биохимические и молекулярно-биологические исследования.
Иммунохимические исследования. Основаны на обнаружении антигенов (токсинов и ферментов) возбудителя в материале от больного с помощью чувствительных серологических реакций.
Биохимические и молекулярно-биологические исследования. Исследуемый материал, полученный из очага инфекции, используют для обнаружения ДНК возбудителя с помощью ПЦР. В случае обнаружения соответствующих молекул можно поставить предварительный диагноз.
Микробиологическая диагностика стрептококковых инфекций (схема 12.1.2)
МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:
Бактериоскопическое исследование. Мазки для первичной бактериоскопии готовят из патологического материала (за исключением крови), окрашивают по методу Грама и микроско-пируют. При положительном результате обнаруживают цепочки грамположительных кокков (см. рис. 12.1.1). Следует иметь в виду, что в патологическом материале стрептококки редко образуют типичные скопления, чаще располагаются поодиночке или небольшими группами по 2-3 бактерии.
Бактериологическое исследование. Исследуемый материал засевают на кровяной агар в чашку Петри. После инкубации при 37 "С в течение 24 ч отмечают характер колоний и наличие вокруг них зон гемолиза. Из части материала, взятого из колоний, готовят мазок, окрашивают по методу Грама и микро-скопируют. Для получения чистой культуры 1-3 подозрительные колонии пересевают в пробирки со скошенным кровяным агаром и сахарным бульоном. На кровяном агаре Streptococcus pyogenes образует мелкие, величиной с булавочную головку, мутноватые круглые колонии. В бульоне стрептококк в отличие от стафилококка дает придонно-пристеночный рост в виде хлопьев или зерен, оставляя среду прозрачной.
По характеру гемолиза на кровяном агаре стрептококки делятся на три группы: 1) негемолитические; 2) aj-гемолитические, или зеленящие, образующие зеленоватую зону частичного гемолиза; 3) р-гемолитические, образующие вокруг колонии полностью прозрачную зону гемолиза.
Заключительным этапом бактериологического исследования является идентификация выделенной культуры по антигенным свойствам (табл. 12.1.2). Серогруппу стрептококков определяют в реакции преципитации с экстрактом из исследуемой культуры (полисахаридным преципитиногеном С) и группоспецифи-
 |
ческими сыворотками (обычно 4 наиболее распространенные серогруппы - А, В, С и D). Развернутое серологическое исследование и типирование стрептококков проводят главным образом для эпидемиологического обследования.
Таблица 12.1.2. Дифференциальные признаки стрептококков
| Вид | Рост при | Рост на средах, содержащих | желчь (40%) | |
| 10"С | 45 °С | метиленовый синий (0,1 %) | хлорид натрия (6,5 %) |
УО «Пинский государственный медицинский колледж»
Дисциплина «Сестринское дело и манипуляционная техника»
Специальность «Лечебное дело»
Учебно-информационный материал
К практическим занятиям
По разделу № 8 «Подготовка пациентов к лабораторным и инструментальным методам исследования»
Практические занятия №№ 25-26
Рассмотрен, обсужден и утвержден
На заседании цикловой комиссии
«Сестринского дела и манипуляционной техники,
Скорой и неотложной медицинской помощи»
Протокол № ____ от ____________20 г.
Подготовка пациентов к лабораторным и инструментальным методам исследования
Тема: « Подготовка пациентов к лабораторным методам исследования»
Практическое занятие № 26
«Правила подготовки пациента сбор материала для лабораторных исследований».
Вопросы:
1. Характеристика основных лабораторных методов исследования мокроты.
2. Подготовка пациента, собор мокроты на общий анализ, направить материал в лабораторию.
3. Подготовка пациента, собор мокроту на бактериологическое исследование, направление материал в лабораторию.
4. Характеристика основных лабораторных методов исследования мочи.
5. Подготовка пациента и собор мочи на общий анализ.
6. Подготовка пациента и собор мочи для исследования по Зимницкому;
7. Подготовка пациента и собор мочи для исследования на сахар.
8. Подготовка пациента и собор мочи для исследования по Нечипоренко.
9. Характеристика основных лабораторных методов исследования кала.
10. Подготовка пациента для сбора кала на скрытую кровь, собор и направление материал на исследование;
11. Подготовка пациента, собор кала на яйца гельминтов и направление материал на исследование.
12. Правила взятия мазков из зева и носа и направление на исследование.
13. Правила оформления направления на исследование.
14. Вопросы и практические задания для самоконтроля
Характеристика лабораторных методов исследования мокроты
Мокрота – это патологический секрет дыхательных путей. В диагностике заболеваний дыхательной системы важное место занимает исследование мокроты, позволяющее судить о характере патологического процесса. При общеклиническом исследовании мокроты определяют ее физико-химическое свойства и клеточный состав. При бактериологическом исследовании мокроты выявляют возбудителя патологического процесса, а также производят подбор антибиотика, эффективного при данном возбудителе.
Мокро́та (лат. sputum) - отделяемый при отхаркивании патологический секрет трахеобронхиального дерева с примесью слюны и секрета слизистой оболочки полости носа и придаточных пазух носа. Мокрота является ценным диагностическим материалом. Исследование мокроты:
ü Макроскопическое – обращают внимание на: характер мокроты, количество, цвет, запах, консистенцию, слоистость, наличие различных включений
ü Микроскопическое – проводится в свежих неокрашенных и фиксированных окрашенных препаратах. Элементы мокроты, которые обнаруживаются в нативном препарате: клеточные элементы, волокнистые образования, кристаллические образования.
ü Бактериоскопическое – позволяет выделить возбудителя заболевания в чистом виде при посеве мокроты на питательные среды, определить вирулентность и лекарственную устойчивость (чувствительность) выделенного микроорганизма, что необходимо для рационального подбора антибактериальных средств.
ü Цитологическое – с учетом соотношения ее клеточных элементов имеет значение для оценки активности заболеваний бронхов и легких, помогает установить преимущественность инфекционного или аллергического воспаления.
Правила техники безопасности при работе с биоматериалом
В экскрементах, носоглоточных выделениях, мокроте, моче и рвотных массах концентрация ВИЧ очень низка или ВИЧ не обнаруживается.
Однако соблюдать меры предосторожности необходимо, т.к. это позволит предотвратить передачу от пациентов других инфекционных агентов.
Меры предосторожности :
1. Избегайте непосредственного контакта с биологическими жидкостями. Работайте только в перчатках. Не допускайте боя лабораторной посуды и травм осколками стекла.
2. Обеззараживайте выделения пациентов перед сливом в канализацию.
3. Тщательно дезинфицируйте лабораторную посуду, судна, мочеприемники, петли для забора кала и т.д.
4. В случае попадания биоматериала на кожу, одежду, слизистые, немедленно провести обработку, следуя рекомендациям из приказа №351.
В целях предупреждения инфицирования мед. персонала необходимо рассматривать всех пациентов как потенциально инфицированных парентеральным гепатитам и ВИЧ – инфекцией или другими переносимыми с кровью и биологической жидкостью вирусными заболеваниями, и следует строжайшим образом соблюдать меры предосторожности.
1. Избегать случайных травм инструментами, инфицированными потенциально зараженным материалом и контакта открытых поражений кожи с биологическими материалами: кровью, спермой, вагинальными выделениями, спинно – мозговой жидкостью, синовиальной, плевральной, брюшной, перикардиальной, околоплодной жидкостью. Концентрация вируса низка или не обнаруживается в выделениях носовой полости, слюне слезах, рвотных массах, моче.
· Не сгибайте, не ломайте иглы после их использования и не надевайте на них колпачки до обработки.
· Колющие и режущие предметы не передавать из рук в руки, а класть в нейтральную зону.
· Обработку острых предметов и игл проводить отдельно от других инструментов.
· Обработку острых, режущих инструментов и игл проводить в перчатках.
· Одноразовые режущие- и колющие предметы после дезинфекции складывать в непрокалываемые контейнеры, сделанные из плотного картона, пластмассы или металла, которые впоследствии утилизуются или идут в переработку.
2. При работе с образцами крови, жидкостями, экскрементами и секретами организма пациентов, а также с материалами и объектами, подвергающиеся загрязнению ими, пользоваться перчатками и желательно менять их после каждого пациента, использовать только целые перчатки из латекса достаточной толщины.
3. Не забывайте тщательно мыть руки и кожу сразу после контакта с жидкостями организма, а также перед и после выполнения манипуляции. Руки должны быть тщательно вымыты, даже если до этого были одеты перчатки. Забор крови проводить одноразовыми шприцами,
4. Пользуйтесь спец. одеждой – халатом, колпаком, маской, очками, водонепроницаемым фартуком и др.
5. Кровь и другие биологические жидкости должны иметь специальную маркировку, при транспортировке все образцы должны быть помещены во второй контейнер или герметичную сумку (спец. контейнер).
6. Необходимо соблюдать максимальную осторожность при заборе крови, при работе с пробирками, заполненными кровью. Не допускать разбрызгивания крови. При разбрызгивании крови следует быстро очистить загрязненную поверхность дезинфицирующим раствором (ОСТ 42-21- 2-85).
7. Шприцы, иглы, колющий и режущий инструментарий многоразового использования обрабатывается по ОСТу 42-21-2-85 и приказу № 408.
8. Важно ограничить инъекции и другие чрезкожные процедуры, сокращение числа ненужных инъекций является важным мероприятием для защиты как медицинских работников, так и пациентов.
9. Использованные тампоны с кровью, иглы, шприцы и другой инструментарий погружать в 3 % раствор хлорамина на 1 час или 6 % перекись водорода на 6 часов, одноразовый инструментарий в 5% раствор хлорамина.
10 . Неукоснительно соблюдать режим дезинфекции, предстерилизационной очистки, стерилизации!
11 . Соблюдать бельевой режим – белье менять по мере загрязнения, регулярно, но не менее 1 раза в 7 дней, Загрязненное белье пациента подлежит немедленной замене.
Оформление направлений на различные виды лабораторных исследований
Цель: Правильно оформить направление.
Показания: Назначение врача.
Оснащение: Бланки, этикетки.
Последовательность действий:
В бланке направления в лабораторию поликлиники укажите:
· Название лаборатории (клиническая, биохимическая, бактериологическая и т.д.).
· Фамилию, имя, отчество пациента.
· Возраст.
· Номер истории болезни.
· Название отделения, номер палаты, (при амбулаторном обследовании - домашний адрес).
· Материал.
· Цель исследования.
· Дату; подпись медицинской сестры, оформляющей направление.
Взятие мокроты на микобактерии туберкулеза
Цель. Выделение микобактерии туберкулеза
Показания . Подозрение на туберкулез легких.
Оснащение . Стерильная сухая банка с плотно закрывающейся крышкой.
Техника взятия мокроты на микобактерии туберкулеза:
1. Накануне вечером пациента предупреждают о предстоящем исследовании следующим образом: «Завтра с 6.00 утра вам нужно начать собирать мокроту на исследование. Мокрота на назначенное вам исследование собирается в течение суток. Это значит, что всю мокроту, которая будет у вас выделяться при кашле, необходимо сплевывать в эту банку. Банку, пожалуйста, ставьте в прохладное место и плотно закрывайте крышкой». Необходимо показать пациенту то место, где в течение суток будет храниться банка с мокротой.
2. Собранную мокроту отправляют в бактериологическую лабораторию.
3. Результат исследования вклеивают в медицинскую карту стационарного больного.
Примечания . Если у пациента выделяется мало мокроты и ее будет недостаточно для исследования, то мокроту можно собирать в течение 3 сут, сохраняя в прохладном месте.
Билет№28
1.Ситуационная задача:
У пациента 38 лет в области левого плеча появился постинъекционный инфильтрат. Дежурная медсестра поставила согревающий компресс.
Объективно: гиперемия в области левого плеча, боль, t тела 37 о С.
1. Продемонстрируйте технику постановки согревающего компресса, оказывая медицинскую услугу в пределах своих полномочий.
2. Назовите правила техники безопасности при работе с дезинфицирующими средствами, обеспечивая безопасную больничную среду для персонала.
2.Технология выполнения сестринских услуг: Продемонстрируйте на фантоме технику постановки масляной клизмы.
В связи с ростом заболеваемости ВИЧ-инфекцией и парентеральными гепатитами В и С увеличивается риск инфицирования медицинских работников во время проведения манипуляций в лечебно-профилактических учреждениях.
Заражение медработника чаще всего проходит при загрязнении кожи и слизистых биологическими жидкостями больного (кровь, сыворотка, ликвор, сперма и др.) и травматизации их во время выполнения медицинских манипуляций (порез, укол, повреждение кожи мелкими отломками кости и др.). Риску профессионального инфицирования больше, всего подвергаются медицинские работники, соприкасающиеся с кровью и ее компонентами. В первую очередь, это сотрудники гематологических, реанимационных, стоматологических, гинекологических, хирургических отделений и отделений гемодиализа, процедурных кабинетов, лабораторий, а также на производстве по заготовке крови, ее компонентов и препаратов.
Учитывая возможную инфицированность крови и биологического материала человека вирусами СПИДа, гепатитов, цитомегаловирусами, рядом онкогенных вирусов, правила профилактики профессионального заражения распространяются на все лечебно-профилактические учреждения независимо от профиля. Эти правила сводятся к максимальному предотвращению возможности загрязнения кожи и слизистых.
Всех пациентов необходимо рассматривать как потенциально инфицированных ВИЧ и другими передаваемыми с кровью инфекциями.
Медицинскому персоналу следует выполнять правила безопасности для защиты кожи и слизистых оболочек при контакте с кровью или жидкими выделениями организма любого пациента:
1. Мыть руки до и после любого контакта с пациентом.
2. При осуществлении манипуляций надевать халат, шапочку, сменную обувь, выходить в которых за пределы лаборатории, отделения запрещается.
3. При выполнении парентеральных манипуляций все имеющиеся на руках повреждения кожи должны быть закрыты напальчниками или лейкопластырем.
4. Рассматривать кровь и жидкие выделения всех пациентов как потенциально инфицированные и работать с ними только в перчатках, которые единожды снятые повторно не используются.
5. Сразу после применения медицинский инструментарии помещать в дезинфицирующий раствор, шприцы и катетеры в специальный контейнер для утилизации острых предметов. Никогда не снимать со шприцев иглодержатели с иглами и не производить никаких манипуляций с использованными иглами.
6. Для предотвращения возможного попадания брызг крови и других биологических жидкостей необходимо пользоваться средствами защиты глаз и лица (маска, очки, щитки-экраны и др.)
7. Рассматривать все белье, запачканное кровью или жидкими выделениями, все образцы лабораторных анализов как потенциально инфицированные.
8. Для дезинфекции применять 3 % и 5 % раствор хлорамина (хлорной извести), 6 % раствор перекиси водорода, 70 0 этиловый спирт.
Все рабочие места, где возможно загрязнение кожных и слизистых покровов медицинских работников кровью и другими биологическими жидкостями, должны быть оснащены аптечкой первой медицинской помощи при аварийных ситуациях.
Аптечка должна храниться в легкодоступном для персонала месте. Необходимо следить за сроком годности входящих в перечень средств. Контроль за готовностью аптечки к работе возлагается на старшую медицинскую сестру структурного подразделения. Все рабочие места должны быть оснащены необходимым количеством дезинфицирующих и моющих средств.
При попадании крови и других биологических жидкостей на спецодежду место загрязнения обработать 3 % или 5 % раствором хлорамина, или 6 % раствором перекиси водорода. Затем обработать перчатки, снять халат, свернуть и сдать для проведения полной дезинфекции. При загрязнении рук кровью или попадании ее на лицо следует немедленно обработать тампоном, смоченным 1 % раствором хлорамина или 70 0 этиловым спиртом, вымыть 2-кратно теплой проточной водой с мылом и насухо вытереть индивидуальным полотенцем.
В аварийных ситуациях, связанных с реальной опасностью заражения в стационарах, микробиологических лабораториях,показана экстренная профилактика (превентивное лечение) антибиотиками или химио-препаратами. Ее назначают при особо опасных инфекциях (чума, холера), ВИЧ-инфекции. В зависимости от степени риска парентерального заражения ВИЧ-инфекцией рекомендуется комбинация 3 препаратов или одного азидотимидина в течение 4 недель.
Важно начинать экстренную профилактику в первые 24 часа после заражения!
Во время вспышки гриппа и других ОРЗ с целью экстренной профилактики показано назначение иммуномодуляторов (иммуностимуляторов) - дибазола, арбидола, а также препаратов, оказывающих вирулицидное действие (ремантадин и др.).
Иммунокорректоры показаны и вне сложных эпидемиологических ситуаций медицинским работникам с иммунодефицитами.
Основные направления разработки программы профилактики внутрибольничной инфекции (ВБИ) у медицинского персонала:
Скрининг медицинского персонала на наличие инфекции:
При приеме на работу,
По эпидемиологическим показаниям.
Разработка критериев:
Приема на работу,
Отстранения от работы,
Ограничения профессиональной деятельности.
Определение профессиональных факторов риска и групп риска в каждом стационаре.
Разработка стандартной технологии выполнения лечебных и диагностических процедур.
Вакцинация медицинского персонала.
Организация диспансерного обследования медицинского персонала:
Выявление и учет заболеваний на основе определения стандартного случая ВБИ,
Определение критериев профессиональных заражений ВБИ,
Лечение профессиональных и непрофессиональных инфекционных заболеваний,
Создание базы данных о заболеваемости персонала и проведенных мероприятиях.
Определение обязанностей администрации больницы и необходимых ресурсов.
Обучение персонала разных типов ЛПУ:
Среднего звена,
Младшего персонала.
